Bagaimana untuk menentukan kepekatan optimum?
Untuk inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), lebih tinggi kepekatan, lebih baik.Kepekatan optimum bergantung pada keadaan eksperimen tertentu dan kesan aruhan yang diingini.
Secara amnya, kepekatan IPTG digunakan dalam julat 0.1-1 mM.Kepekatan yang lebih rendah boleh mengurangkan kesan buruk terhadap pertumbuhan sel dan boleh mengurangkan sitotoksisiti akibat ekspresi berlebihan protein sasaran.Kepekatan yang lebih tinggi boleh menyebabkan beban metabolik sel yang berlebihan, menjejaskan pertumbuhan sel dan kecekapan ekspresi.
Cara untuk menentukan kepekatan optimum adalah dengan menilai tahap ekspresi protein sasaran dengan menjalankan ujian induksi IPTG pada kepekatan yang berbeza.Ujian kultur berskala kecil boleh dilakukan menggunakan julat kepekatan IPTG (cth 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, dsb.) dan kesan ekspresi pada kepekatan yang berbeza boleh dinilai dengan mengesan tahap ekspresi protein sasaran (cth Barat pengesanan blot atau pendarfluor).Mengikut keputusan eksperimen, kepekatan dengan kesan ekspresi terbaik dipilih sebagai kepekatan optimum.
Di samping itu, anda juga boleh merujuk kepada literatur yang berkaitan atau pengalaman makmal lain untuk memahami julat kepekatan IPTG yang biasa digunakan di bawah keadaan eksperimen yang serupa, dan kemudian mengoptimumkan dan menyesuaikan mengikut keperluan eksperimen.
Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa kepekatan optimum mungkin berbeza-beza bergantung pada sistem ekspresi yang berbeza, protein sasaran dan keadaan eksperimen, jadi yang terbaik adalah untuk mengoptimumkan berdasarkan kes demi kes.
Masa siaran: Sep-28-2023