Bagaimana untuk menentukan kepekatan optimum?
Bagi IPTG penginduksi (isopropil-beta-d-tiogalactoside), semakin tinggi kepekatannya, semakin baik. Kepekatan optimum bergantung pada keadaan eksperimen khusus dan kesan induksi yang diingini.
Secara amnya, kepekatan IPTG digunakan dalam julat 0.1-1 mM. Kepekatan yang lebih rendah dapat mengurangkan kesan buruk terhadap pertumbuhan sel dan dapat mengurangkan sitotoksisiti akibat ekspresi berlebihan protein sasaran. Kepekatan yang lebih tinggi boleh menyebabkan beban metabolik sel yang berlebihan, yang menjejaskan pertumbuhan sel dan kecekapan ekspresi.
Cara untuk menentukan kepekatan optimum adalah dengan menilai tahap ekspresi protein sasaran dengan menjalankan ujian induksi IPTG pada kepekatan yang berbeza. Ujian kultur berskala kecil boleh dilakukan menggunakan julat kepekatan IPTG (contohnya 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, dsb.) dan kesan ekspresi pada kepekatan yang berbeza boleh dinilai dengan mengesan tahap ekspresi protein sasaran (contohnya Western blot atau pengesanan pendarfluor). Menurut keputusan eksperimen, kepekatan dengan kesan ekspresi terbaik dipilih sebagai kepekatan optimum.
Di samping itu, anda juga boleh merujuk kepada literatur yang berkaitan atau pengalaman makmal lain untuk memahami julat kepekatan IPTG yang biasa digunakan di bawah keadaan eksperimen yang serupa, dan kemudian mengoptimumkan dan menyesuaikannya mengikut keperluan eksperimen.
Adalah penting untuk ambil perhatian bahawa kepekatan optimum mungkin berbeza-beza bergantung pada sistem ekspresi yang berbeza, protein sasaran dan keadaan eksperimen, jadi adalah lebih baik untuk dioptimumkan berdasarkan kes demi kes.
Masa siaran: 28 Sep-2023