Terdapat ramai wira yang tidak didendang di sekeliling kita, yang kelihatan biasa-biasa sahaja, tetapi sebenarnya mereka secara senyap banyak menyumbang kepada kita. Proteinase K ialah "wira yang tidak didendang" dalam industri diagnostik molekul, walaupun berbanding dengan "wira besar dan berkuasa" dalam industri, proteinase K begitu sederhana sehingga kita telah lama terlepas pandang kepentingannya. Dengan tercetusnya wabak mahkota baharu, permintaan untuk proteinase K telah melonjak, dan bekalan di dalam dan luar negara jauh ketinggalan berbanding penggunaannya, dan semua orang tiba-tiba menyedari bahawa proteinase K sangat penting.
Apakah kegunaan proteinase K?
Proteinase K ialah protease serina dengan aktiviti enzim proteolitik dan boleh mengekalkan aktiviti dalam pelbagai persekitaran (pH (4-12.5), penimbal garam tinggi, suhu tinggi 70°C, dll.). Di samping itu, aktiviti proteinase K tidak dihalang oleh SDS, urea, EDTA, guanidina hidroklorida, guanidina isotiosianat, dll., dan sejumlah detergen juga boleh meningkatkan aktiviti proteinase K. Dalam rawatan perubatan (pembasmian kuman virus dan mikrob), makanan (pelembutan daging), kulit (pelembutan rambut), pembuatan wain (penjernihan alkohol), penyediaan asid amino (bulu terdegradasi), pengekstrakan asid nukleik, hibridisasi in situ, dll., proteinase K Terdapat aplikasi. Aplikasi yang paling biasa digunakan ialah pengekstrakan asid nukleik.
Proteinase K boleh mengenzimolisis semua jenis protein dalam sampel, termasuk histon yang terikat rapat dengan asid nukleik, supaya asid nukleik boleh dilepaskan daripada sampel dan dilepaskan ke dalam ekstrak, memudahkan langkah pengekstrakan dan penulenan seterusnya. Dalam pengesanan asid nukleik virus, proteinase K merupakan salah satu komponen penting dalam larutan pensampelan virus. Proteinase K boleh memecahkan dan menyahaktifkan protein salut virus, yang lebih selamat semasa peringkat pengangkutan dan pengesanan; di samping itu, proteinase K juga boleh mendegradasi RNase, menghalang degradasi RNA virus dan memudahkan pengesanan asid nukleik.
Kemasyhuran proteinase K dalam sekelip mata
Sama ada dalam bidang penyelidikan saintifik atau dalam bidang IVD, pengekstrakan asid nukleik merupakan eksperimen paling asas, jadi proteinase K sentiasa menjadi kewujudan yang sangat penting. Walau bagaimanapun, pada masa lalu, proteinase K kurang dikenali berbanding peranannya. Sebahagian besarnya adalah kerana hubungan penawaran dan permintaan proteinase K sangat stabil. Tidak ramai yang akan beranggapan bahawa bekalan proteinase K akan menjadi masalah.
Dengan tercetusnya wabak mahkota baharu, permintaan untuk ujian asid nukleik telah melonjak. Sehingga akhir Jun 2020, China telah menyelesaikan hampir 90 juta ujian mahkota baharu, dan jumlah ini lebih membimbangkan pada skala global. Dalam eksperimen pengekstrakan asid nukleik, kepekatan kerja proteinase K adalah kira-kira 50-200 μg/mL. Secara amnya, ia mengambil masa kira-kira 100 μg proteinase K untuk mengekstrak sampel asid nukleik. Dalam penggunaan sebenar, untuk meningkatkan kecekapan pengekstrakan asid nukleik, selalunya Proteinase K akan digunakan dalam jumlah yang lebih tinggi. Pengesanan asid nukleik terhadap koronavirus baharu telah membawa sejumlah besar permintaan proteinase K. Keseimbangan bekalan dan permintaan asal proteinase K cepat dipecahkan, dan proteinase K menjadi bahan pencegahan wabak yang penting dalam sekelip mata.
Kesukaran dalam penghasilan proteinase K
Walaupun dengan perkembangan wabak ini, nilai penting proteinase K telah dihargai oleh orang ramai, adalah memalukan bahawa disebabkan oleh proteinase K yang terlalu rendah, hanya sedikit syarikat domestik yang terlibat dalam pengeluaran proteinase K. Apabila orang ramai ingin mewujudkan pengeluaran proteinase K Semasa proses pengeluaran, didapati bahawa proteinase K adalah protein yang sangat istimewa. Adalah sangat mencabar untuk mengembangkan kapasiti pengeluaran proteinase K dalam tempoh masa yang singkat.
Pengeluaran proteinase K secara besar-besaran menghadapi kesukaran berikut
1. Ekspresi rendah
Proteinase K boleh mendegradasi kebanyakan protein secara tidak spesifik dan menyebabkan ketoksikan yang serius kepada sel perumah ekspresi. Oleh itu, tahap ekspresi proteinase K pada amnya sangat rendah. Penyaringan sistem ekspresi dan strain yang mengekspresikan proteinase K dengan tinggi pada amnya memerlukan kitaran yang lebih lama.
2. Sisa pigmen dan asid nukleik
Penapaian berskala besar memperkenalkan sejumlah besar pigmen dan sisa asid nukleik perumah. Sukar untuk membuang bendasing ini dengan proses penulenan yang mudah, dan penulenan yang kompleks meningkatkan kos dan mengurangkan kadar pemulihan.
3. Ketidakstabilan
Proteinase K tidak cukup stabil, ia boleh mengenzimolisis dirinya sendiri, dan sukar untuk menyimpannya secara stabil pada suhu 37°C untuk masa yang lama tanpa agen pelindung.
4. Mudah termendak
Semasa menyediakan serbuk proteinase K yang dikeringkan beku, untuk memastikan kandungan pepejal proteinase K dalam serbuk kering beku adalah besar, perlu menambah agen pelindung kering beku pada kepekatan yang tinggi, tetapi apabila kepekatan proteinase K mencapai 20mg/mL dan ke atas, ia mudah untuk membentuk endapan yang membentuk pengagregatan, yang membawa kesukaran yang besar kepada pengeringan beku proteinase K yang mempunyai kandungan pepejal yang tinggi.
5. Pelaburan besar
Proteinase K mempunyai aktiviti protease yang kuat dan boleh menghidrolisis protease lain di makmal. Oleh itu, proteinase K memerlukan kawasan pengeluaran, peralatan dan kakitangan khusus untuk penyelidikan dan pembangunan serta pengeluaran.
Larutan proteinase K XD BIOCHEM
XD BIOCHEM mempunyai platform ekspresi dan penulenan protein yang matang, dan mempunyai pengalaman yang kaya dalam ekspresi dan penulenan protein rekombinan dan pengoptimuman proses pengeluaran. Melalui pembentukan pasukan penyelidikan dan pembangunan yang pesat, proses pengeluaran proteinase K berskala besar telah diatasi. Output bulanan serbuk kering beku adalah lebih daripada 30 KG. Produk ini mempunyai prestasi yang stabil, aktiviti khusus enzim yang tinggi, dan tiada sisa sitokrom perumah dan asid nukleik. Selamat datang untuk menghubungi XD BIOCHEM Dapatkan pakej percubaan (E-mel:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Penyelesaian teknikal XD BIOCHEM merangkumi
Menggunakan integrasi plasmid berbilang salinan, strain ekspresi tinggi dengan tahap ekspresi 8g/L dipilih, yang mengatasi masalah tahap ekspresi proteinase K yang rendah.
Melalui penubuhan proses penulenan berbilang langkah, sisa sitokrom perumah dan asid nukleik proteinase K berjaya disingkirkan di bawah nilai piawai.
Melalui saringan daya pemprosesan tinggi bagi formulasi penimbal pelindung, penimbal yang boleh menyimpan proteinase K secara stabil pada suhu 37°C telah dipilih.
Penimbal saringan mengatasi masalah proteinase K yang mudah diagregatkan dan dimendakkan pada kepekatan tinggi, dan meletakkan asas untuk pengeringan beku kandungan pepejal proteinase K yang tinggi.
Sampel proteinase K XD BIOCHEM
Ujian kestabilan XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan ketara dalam aktiviti selepas 80 hari pada suhu bilik
Ujian kestabilan XD BIOCHEM proteinase K: tidak akan ada perubahan aktiviti yang ketara selepas 80 hari pada suhu bilik.
Perbandingan kesan pengekstrakan asid nukleik XD BIOCHEM proteinase K dan produk pesaing. Dalam proses pengekstrakan asid nukleik, XD BIOCHEM dan proteinase kompetitif K masing-masing digunakan. Kecekapan pengekstrakan XD BIOCHEM proteinase K adalah lebih tinggi dan nilai Ct gen sasaran adalah lebih rendah.
Masa siaran: 31 Dis-2021